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實驗室組織細胞的破碎方法

點擊次數(shù):2124 更新時間:2019-11-20

實驗室對組織細胞的破碎方法很多,有機械方法、物理方法、化學方法和生物化學方法等。

在破碎前,材料常需要預處理,如動物材料要除去與實驗無關甚至有妨礙的結締組織,脂肪組織和血污等,植物種子需要除殼,微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等。不同實驗規(guī)模、不同實驗材料和實驗要求,使用的破碎方法和條件也不同。一些堅韌組織,如肌肉、植物的根莖等,常需要強烈的攪拌或研磨作用,才能把其組織細胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等,用普通的玻璃勻漿器即可達到*破壞細胞的目的。對同一實驗材料,由于實驗目的(要求)的不同,采用的破碎方式也存在一定差異,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者必須保持十分溫和的條件,以保持分子的完整性;后者可采用強烈手段。

  機械法

  主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。

  1)組織搗碎機 一般用于動物組織、植物肉質種子、柔嫩的葉芽等,轉速可高達10000rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。

  2)勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離,破碎細胞的程度比組織搗碎機高。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。

  3)研缽 多用于細菌或其他堅硬植物材料,研磨時常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。

  4)細菌磨 是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時先把細菌和研磨粉調成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細菌細胞*磨碎。

  2.物理法

  主要通過各種物理因素使組織細胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有:

  1)反復凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,再緩慢的融化,反復多次,多用于動物性材料。

  2)急熱驟冷法 將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細菌及病毒材料。

  3)超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC,功率200-500瓦范圍,處理時間有數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘不等,處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料。

  3.化學及生物化學法

  有自溶法,酶解法和表面活性劑法等。

  1)自溶法 在一定PH和適當?shù)臏囟认拢媒M織細胞內自身的酶系統(tǒng)將細胞破碎的方法。此過程需較長時間,常用少量防腐劑如甲苯、仿等防止細胞的污染。

  2)酶溶法 利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等,將細胞壁分解,使細胞內含物釋放出來。有些細菌對溶菌酶不敏感,加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后,使之轉為對溶菌酶敏感而溶解。

3)表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉、氯化十二烷基吡啶等。

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